水产品中荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)RT-LAMP可视化检测方法的建立及应用

作者：魏梦泽; 韩姣姣; 芦晨阳; 周君; 陈炯; 曲凌云; 樊景凤; 陈刚; 苏秀榕^*

来源：海洋科学, 2018, 42(11): 91-98.

• 荧光假单胞菌
• 逆转录-环介导等温扩增
• 活菌检测
• 可视化检测

荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)在低温储存的水产品中仍能存活并繁殖,是导致水产品品质下降和恶化的主要原因。因此开发一种快速高效的检测手段显得尤为迫切。本文将逆转录-环介导等温扩增(ReverseTranscriptionLoop-mediatedIsothermalAmplification,RT-LAMP)技术与可视化检测手段结合,通过条件优化,确定了最佳反应温度(63℃),反应时间(60min)和最适的Mg2+(2.5mmol/L)添加量,建立了快速、高效、灵敏的RT-LAMP检测方法。灵敏度检测表明:本方法最低检出限为5.4 copies/反应,比PCR检测方法高200倍。该方法结合SYBR-GreenI染色,通过目测就可以直接鉴别荧光假单胞菌,使得检测结果更加直观,简便可行。

• 单位
  国家海洋环境监测中心; 宁波大学; 自然资源部第一海洋研究所; 复旦大学