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摘要
据报道，Polo样蛋白激酶3(polo-like kinase 3,PLK3)具有促进前列腺癌细胞的生长增殖及迁移能力。本研究旨在构建pCDNA3-FLAG-PLK3真核表达质粒，初步探究其在前列腺癌细胞系内的表达与定位，并检测前列腺癌细胞系中的内源PLK3蛋白水平。根据PLK3蛋白的编码序列设计合成PLK3蛋白编码序列的引物，以含有PLK3蛋白编码序列的质粒作为模板，并通过PCR扩增目的片段，再用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切、连接并转化后，挑取单克隆菌落扩增并提取质粒，进行双酶切鉴定以及测序比对。将序列比对正确的重组质粒转染至CWR22Rv1及LNCaP细胞中，利用Western Blot实验检测重组质粒在CWR22Rv1和LNCaP细胞中的表达；以免疫荧光染色实验检测外源的FLAG-PLK3蛋白在细胞中的定位。此外，利用Western Blot实验检测了在五种前列腺癌细胞系中内源PLK3蛋白水平。本研究经过以上实验构建出了FLAG-PLK3真核表达质粒，并且验证其能够在前列腺癌细胞中表达；通过免疫荧光确定FLAG-PLK3蛋白在细胞中主要分布在细胞膜中，少量分布在细胞质；在检测的五种前列腺癌细胞系中，DU145中PLK3蛋白水平最高，CWR22Rv1中PLK3蛋白水平最低。本研究为后续深入探究PLK3蛋白在前列腺癌细胞系中的功能与机制提供了科学依据。
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单位生命科学学院; 中国医科大学
