肠激酶在毕赤酵母中的分泌表达优化

作者：梁启星; 石竟成; 金学荣; 堵国成; 康振^*

来源：生物工程学报, 2020, 36(08): 1689-1698.

DOI：10.13345/j.cjb.190577

• 毕赤酵母
• 肠激酶
• 信号肽
• 共表达
• N端改造

肠激酶(Enterokinase,EK)是一类特异性识别切割DDDDK序列的丝氨酸蛋白酶,作为一种工具酶广泛应用于生物医药领域。目前,EK在毕赤酵母Pichiapastoris中的表达水平较低,难以应用。本研究比较了6种不同的信号肽SP1、SP2、SP3、SP4、SP7和SP8对毕赤酵母分泌表达EK的影响。在摇瓶水平上,与α-factor信号肽相比,SP1信号肽显著提高了EK的分泌表达(从6.8 mg/L提高至14.3 mg/L),酶活从(2 390±212) U/mL提高至(4 995±378) U/mL。在此基础上,通过共表达毕赤酵母内源蛋白Kex2,EK酶活提高至(7 219±489) U/mL。另外,N端融合WLR三个氨基酸进一步提高酶活至(15 145±920) U/mL,比酶活为(1 174 600±53 100) U/mg。EK在毕赤酵母中的高效分泌表达为未来应用奠定了基础。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 生物工程学院; 江南大学