血管性血友病因子裂解酶金属蛋白酶域的克隆和表达

作者：高维强; 白霞; 傅建新; 阮长耿

来源：中国病理生理杂志, 2004, (10): 91-95.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2004.10.021

• vonWillebrand因子
• 克隆,基因
• 基因表达

目的 :克隆和表达血管性血友病因子裂解酶 (vWF -cp)的金属蛋白酶域。方法 :应用PCR从含有人vWF -cp金属蛋白酶域的质粒中扩增出该区域 ,克隆至pUC18载体后行序列分析 ,并将其重组于带有 6×HisTag的融合蛋白表达载体pET2 8a(+)中 ,在大肠杆菌DE3/plySs中诱导表达。融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后 ,采用Westernblot印迹鉴定。结果 :PCR扩增得到 6 5 8bp的vWF -cp金属蛋白酶域的基因片段 ,测序结果与GenBank序列一致。重组表达质粒经异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h后表达的融合蛋白占菌体总蛋白的 2 8% ,进一步纯化后其纯度在 95 %以上。结论 :在大肠杆菌中高效表达了人vWF -cp的金属蛋白酶结构域 ,为深入研究vWF -cp结构与功能的关系奠定了基础

• 单位
  苏州大学附属第一医院