微小RNA-122在人乳腺癌组织中的表达及对体外培养人乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的影响

作者：王鹏^*; 李凯敏; 冯瑞刚

来源：中国医药, 2020, 15(01): 62-66.

• 乳腺癌
• 微小RNA-122
• 他莫昔芬耐药
• 雌激素受体α

目的探讨微小RNA-122(miR-122)在人乳腺癌组织中的表达及对体外培养人乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的影响。方法收集2015年1—6月河北省保定市第二中心医院行乳腺切除术的56例Luminal型乳腺癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测miR-122表达量。所有患者规范口服他莫昔芬3年,按照实体瘤疗效评价标准划分为他莫昔芬敏感者和他莫昔芬耐药者。体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,他莫昔芬长期浓度梯度递增法体外建立MCF-7TamR耐药细胞株;转染miR-122抑制剂(抑制剂组),采用噻唑蓝(MTT)法检测他莫昔芬对MCF-7细胞、MCF-7TamR细胞以及抑制剂组MCF-7TamR细胞增殖活性的影响。采用q PCR法检测雌激素受体α(ER-α)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3) mRNA表达。采用蛋白质印迹法检测ER-α、HER-2、细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)、磷酸化ERK-MAPK(p-ERK/MAPK)蛋白表达。结果乳腺癌组织中miR-122相对表达量明显高于癌旁组织[(0. 70±0. 38)比(0. 24±0. 10)],他莫昔芬耐药患者(11例)肿瘤组织中miR-122相对表达量明显高于敏感患者(45例)[(0. 89±0. 13)比(0. 67±0. 15)](均P <0. 001)。体外成功建立MCF-7TamR耐药细胞株,不同浓度他莫昔芬(0. 1、0. 5、2. 5、12. 5、62. 5、312. 5μmol/L)对MCF-7TamR细胞的增殖抑制率分别均明显低于MCF-7细胞(均P <0. 05); MCF-7TamR细胞的耐药指数为4. 97。转染miR-122抑制剂后,抑制剂组MCF-7TamR细胞miR-122表达量为(0. 14±0. 04),明显低于空白对照组[CTL组:(0. 67±0. 09)]和空转染组[NC组:(0. 65±0. 08)](均P <0. 001)。不同浓度他莫昔芬对抑制剂组MCF-7TamR细胞的增殖抑制率明显高于CTL组和NC组(均P <0. 05)。经q PCR法,抑制剂组MCF-7TamR细胞ER-αmRNA表达量为(1. 02±0. 17),明显高于CTL组和NC组; HER-2和MAPK3 mRNA表达量为(0. 37±0. 09)和(0. 25±0. 07),明显低于CTL组和NC组(均P <0. 05)。经蛋白质印迹法,抑制剂组MCF-7TamR细胞ER-α蛋白表达量为(0. 91±0. 18),明显高于CTL组和NC组; HER-2和p-ERK/MAPK蛋白表达量为(0. 24±0. 09)和(1. 15±0. 26),明显低于CTL组和NC组(均P <0. 05)。结论乳腺癌组织中miR-122表达增高,下调miR-122可明显逆转乳腺癌MCF-7TamR耐药细胞对他莫昔芬的抗性,并抑制MCF-7TamR细胞增殖,其机制可能与阻断ERK/MAPK信号通路,提高ER表达有关。