p53凋亡刺激蛋白2基因肝脏条件性敲除小鼠的构建和鉴定

作者：寇卜心; 柴梦音; 豆双双; 庞丽君; 陈德喜; 刘晓霓^*

来源：实用肝脏病杂志, 2022, 25(02): 170-174.

• Cre-LoxP系统
• p53凋亡刺激蛋白2
• 条件性敲除
• 小鼠

目的 采用Cre-LoxP系统构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因肝脏条件性敲除小鼠。方法 利用自行设计的sgRNA序列，在ASPP2基因两端插入LoxP序列，构建ASPP2-flox小鼠。采用PCR法和测序法对F0代和F1代小鼠进行基因型鉴定。将ASPP2-flox F1小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配，获得肝脏敲除ASPP2基因小鼠。采用PCR法进行基因型鉴定。采用Westernblot和免疫组化法检测ASPP2基因肝脏敲除小鼠肝脏ASPP2蛋白表达。结果 对F0代和F1代动物基因行PCR和测序结果表明，构建ASPP2-flox小鼠成功；F1代杂合子的基因型为ASPP2 ~(fl/-);将F1代杂合子与Alb-Cre小鼠进行杂交后，回交ASPP2 ~(fl/-)小鼠，其基因型为ASPP2~(fl/fl) Cre~T,即为ASPP2肝脏条件性敲除小鼠；经Western blot和免疫组化法检测显示ASPP2~(fl/fl) Cre~T小鼠肝脏ASPP2蛋白表达显著减少。结论 基于Cre-LoxP系统成功构建ASPP2基因肝脏条件性敲除小鼠，为后续实验作了良好的基础。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院; 北京市肝病研究所