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摘要
目的:构建人紫杉醇耐药基因1(TXR1)的表达载体并对MCF-7人乳腺癌细胞系进行转染且检测其表达。方法:RT-PCR方法扩增TXR1 CDS片段,并将扩增的片段插入pEGFP-C3真核表达载体,构建成含TXR1 cDNA的重组载体pEGFP-TXR1,以脂质体介导该质粒转染人乳腺癌细胞系MCF-7,应用RT-PCR、Western Blot和荧光显微镜鉴定转染细胞中TXR1的表达。用MTT法对转染前后的MCF-7细胞进行紫杉醇耐药性分析。结果:成功构建含TXR1 cDNA的重组载体pEGFP-TXR1,转染MCF-7细胞后成功表达TXR1蛋白,在转染的细胞中,证实有TXR1 mRNA和蛋白表达上调。MTT法显示转染了TXR1的MCF-7细胞获得紫杉醇耐药性。结论:成功构建TXR1表达载体,并在人乳腺癌细胞系MCF-7得到表达,获得紫杉醇耐药性。
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单位首都医科大学附属北京友谊医院
