组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体的构建及其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达

作者：朱晓燕; 岳保红; 丁一; 张钦宪

来源：郑州大学学报(医学版), 2006, 41(3): 457-460.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6825.2006.03.023

• 组织型纤溶酶原激活剂
• 真核表达载体
• 转化
• 转染
• 瞬时表达

目的:构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)真核表达载体,并检测其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达.方法:以含t-PA cDNA的质粒PETPFR为模板,PCR扩增目的片段t-PA,HindⅢ和Sal Ⅰ双酶切t-PA,HindⅢ和xhoⅠ双酶切pcDNA3真核表达载体.Sal Ⅰ和Xho Ⅰ的黏性末端互补,体外连接酶切产物,重组体转化感受态JM109细菌,筛选菌落和测序鉴定.以脂质转染胺试剂LipokctamineTM2000将pcDNA3-t-PA转染入乳癌细胞系MCF-7,G418筛选.应用原位杂交技术,以地高辛标记的t-PA cDNA为探针,显示t-PA在MCF-7中的瞬时表达.结果:电泳获得目的片段t-PA的条带2.1kb,初步鉴定为阳性重组体,测序证实为正确的t-PA序列.MCF-7细胞原位杂交显示大部分细胞表达阳性.结论:组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体构建成功,可在乳癌细胞系MCF-7中表达.

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 郑州大学; 基础医学院