百草枯诱导下星形胶质细胞对SH-SY5Y细胞热休克蛋白表达的影响

作者：何晓燕; 崔宝龙; 李鹏飞; 姚鲁清; 赵芳; 周畅^*

来源：精准医学杂志, 2020, 35(04): 339-346.

DOI：10.13362/j.jpmed.202004014

• 肌萎缩侧索硬化
• 百草枯
• 星形胶质细胞
• 细胞系,肿瘤
• 神经母细胞瘤
• 胶质母细胞瘤
• 热休克蛋白质类
• DNA结合蛋白质类
• 共同培养技术

目的探讨百草枯(PQ)诱导下星形胶质细胞U87对SH-SY5Y细胞热休克蛋白表达的影响。方法U87细胞和SH-SY5Y细胞分别经0、100、200、300、400、500μmol/L PQ处理后,采用CCK8法检测各组细胞存活率。以Trans-well共培养方法建立U87和SH-SY5Y细胞共培养体系,细胞分为空白对照组(SH-SY5Y细胞无PQ处理)、模型对照组(SH-SY5Y细胞经300μmol/L PQ处理24 h)、共培养组(U87细胞和SH-SY5Y细胞共培养状态下经300μmol/L PQ处理24 h),采用CCK8法检测各组SH-SY5Y细胞的存活率,细胞免疫荧光化学染色法检测SH-SY5Y细胞内异常TAR DNA/RNA结合蛋白43(TDP43)聚集的定位表达,蛋白免疫印迹法检测SH-SY5Y细胞内热休克转录因子1(HSF1)、热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白β8(HSPB8)、TDP43蛋白的表达水平。结果随着PQ浓度的增加,U87和SH-SY5Y细胞的存活率均逐渐降低(F=9.14、37.52,P<0.05);与对照组相比较,当PQ浓度为200μmol/L时,SH-SY5Y细胞的存活率显著降低(P<0.05),当PQ浓度为300μmol/L时,U87细胞的存活率显著降低(P<0.05)。空白对照组、模型对照组和共培养组之间的SH-SY5Y细胞存活率有显著性差异(F=22.69,P<0.01);与空白对照组相比,模型对照组SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P<0.05);与模型对照组相比,共培养组SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P<0.05)。空白对照组SH-SY5Y细胞中的TDP43蛋白在细胞核内表达,模型对照组SH-SY5Y细胞中的TDP43蛋白在细胞质中表达。空白对照组、模型对照组和共培养组之间的HSF1、HSP70、HSPB8和TDP43表达有显著性差异(F=6.42～28.19,P<0.05);与空白对照组相比,模型对照组SH-SY5Y细胞中HSP70、HSPB8以及TDP43表达均显著升高(P<0.05);与模型对照组相比,共培养组SH-SY5Y细胞中HSF1、HSPB8表达均显著降低(P<0.05)。结论 PQ诱导下的星形胶质细胞可以抑制SH-SY5Y细胞内HSF1及HSPB8的表达,并促进SH-SY5Y细胞死亡。

• 单位
  青岛大学附属医院; 神经内科