HOTAIR上调miR-152靶向调控HLA-G的生物信息作用预测与验证

作者：李晓娟; 周芝熠; 王珏; 钱源^*

来源：天津医药, 2019, 47(10): 1014-1019.

• HLA-G抗原
• 基因,报告
• HOTAIR
• miR-152-3p
• HTR-8/SVneo
• 双荧光素酶报告基因

目的预测并验证HOX转录反义RNA(HOTAIR)通过上调miR-152-3p对人类白细胞抗原-G(HLA-G)靶向调控作用。方法利用生物信息学网站及软件预测miR-152-3p与HOTAIR和HLA-G基因3’非翻译区(UTR)的结合位点,设计合成含有与miR-152-3p结合位点的HOTAIR和HLA-G基因3’-UTR序列及其突变序列,并构建HOTAIR和HLA-G野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体。经双酶切电泳和测序鉴定后,HOTAIR和HLA-G野生型与突变型双荧光素酶报告基因载体分别与miR-152-3p模拟物(mimics)和miRNA无义序列阴性对照(mimics NC)共转染HTR-8/SVneo细胞,检测荧光素酶活性,观察miR-152-3p对HOTAIR和HLA-G表达的影响。结果双酶切电泳和测序结果显示,野生型和突变型的HOTAIR和HLA-G基因载体片段大小、序列与实验预期一致,载体构建成功。转染miR-152-3p mimics后的HOTAIR及HLA-G野生型荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而对突变型HOTAIR和HLA-G载体的荧光素酶表达无明显抑制作用(P>0.05)。结论 HOTAIR通过上调miRNA-152-3p靶向调控HLA-G。

• 单位
  昆明医科大学第一附属医院