麻疹减毒活疫苗S191感染性克隆的构建及鉴定

作者：王健; 陈祥鹏; 孙丽媛; 李莉莉; 郑凡; 刘君; 郑秀玉

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2014, 34(12): 921-927.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.12.006

• 麻疹病毒
• 反向遗传学
• RNA聚合酶

目的构建稳定的麻疹减毒活疫苗S191感染性克隆。方法采用全基因合成方法获得麻疹减毒活疫苗S191 cDNA全长及辅助蛋白N、P、L基因片段,分别将该4个基因构建入转录与表达载体pVAX1后,共转染293T细胞,通过与Vero细胞共培养拯救出麻疹病毒,对拯救获得的病毒用间接免疫荧光法、传代实验及序列测定进行鉴定分析。结果酶切及测序表明除遗传标签(突变碱基2101 C-A)外其基因序列正确,用免疫荧光技术证实其能与麻疹病毒核衣壳蛋白和磷蛋白单克隆抗体产生特异性反应,所拯救病毒感染Vero细胞后可致细胞病变效应,传代实验表明病毒可以稳定感染Vero细胞。结论成功构建了稳定的麻疹减毒活疫苗S191感染性克隆,初步建立了用于麻疹病毒研究的反向遗传学方法,为新型疫苗的研发提供参考资料。

• 单位
  首都医科大学附属北京儿童医院