牙鲆卵原细胞鉴定、分离及纯化的初步研究

作者：孙朝徽; 于清海; 周勤; 宋立民; 姜秀凤; 王青林; 任建功; 王玉芬^*; 任玉芹^*

来源：中国细胞生物学学报, 2018, 40(09): 1510-1517.

• 牙鲆
• 卵原细胞
• 鉴定
• 分离
• 纯化
• vasa

为获得高比例和高数量的卵原细胞,采用酶组合消化和Percoll梯度离心法开展了不同月龄牙鲆卵原细胞分离纯化的研究。通过光学观察及Vasa蛋白在生殖细胞的定位对卵原细胞进行了鉴定区分。结果表明,所获卵巢单细胞悬液中,6月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量为(9.86±1.02)×104个,显著高于18月龄和30月龄(P<0.05)。Percoll梯度离心后,卵原细胞主要分布于L-15与20% Percoll梯度液间、20%35% Percoll梯度液间,其占比高达75%以上,显著高于纯化前卵原细胞占比(P<0.05);且细胞存活率高达84%以上,与纯化前细胞存活率无显著性差异(P>0.05)。除18月龄外,6月龄和30月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量纯化前后均无显著性差异(P>0.05)。该文通过酶组合消化和Percoll梯度离心的方法对最适月龄—6月龄牙鲆卵原细胞进行分离纯化,最终可获得高比例、高数量和高活性的卵原细胞,为进一步开展牙鲆生殖细胞移植、基因修饰等研究提供了必备的细胞来源。

• 单位
  中国水产科学研究院