猫传染性腹膜炎病毒N蛋白的原核表达及多抗制备

作者：牛铮; 徐沙沙; 张静怡; 张依玲; 阚子斐; 张淑娟; 邹宏; 邹卓岚; 冉玲; 宋振辉^*

来源：西南大学学报(自然科学版), 2021, 43(12): 1-9.

DOI：10.13718/j.cnki.xdzk.2021.12.001

• 猫传染性腹膜炎病毒
• 蛋白表达和纯化
• 多克隆抗体制备
• 特异性鉴定

猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)是冠状病毒中的重要成员,也是引起猫传染性腹膜炎的主要病原.参考GenBank数据库中FIPV核衣壳蛋白基因序列,设计特异性引物,以病料组织中提取的RNA为模板,反转录成cDNA,通过PCR特异性扩增N基因序列,将其克隆至pMD19-T载体并转化至Trans5α感受态细胞,经筛选、菌液PCR与限制酶双酶切鉴定后,获得重组克隆质粒pMD19-T-N.以pMD19-T-N为模板,亚克隆N基因,将其与Pet-28a载体连接后转化至表达菌株Rosetta感受态细胞,完成Pet-28a-N重组表达质粒的构建.用IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白皮下多点注射免疫比利时兔,制备多克隆抗体.最终通过Western-Blot与免疫组化技术检测多克隆抗体的特异性. FIPV N蛋白多克隆抗体的制备,为猫传染性腹膜炎的进一步研究及临床治疗提供了必备的实验材料.

• 单位
  西南大学