东方田鼠骨髓基因池的构建及抗日本血吸虫抗性相关基因的筛选

作者：秦志强; 胡维新; 邬**; 许冰; 申群喜; 龚强; 吴驰

来源：生命科学研究, 2004, (04): 333-338.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2004.04.008

• 东方田鼠
• 基因池
• 表达克隆法
• 日本血吸虫
• 抗性相关基因 Microtus fortis
• gene pool
• expression cloning
• Schistosoma japonicum
• resistance associated gene

利用表达克隆法,从东方田鼠骨髓细胞中克隆出抗日本血吸虫抗性相关基因.首先提取高质量的mRNA,逆转录成cDNA,将cDNA与哺乳动物细胞瞬时表达载体pcDNA1.1/Amp连接,建立表达cDNA文库;将cDNA文库分成A-H8个基因池,转染HEK293细胞,48h后收集培养上清,获得条件培养基.将条件培养基与日本血吸虫童虫一起培养,观察杀虫效应,取对童虫抑制作用最强的基因池E再分成8个亚基因池E1-8,分别转染HEK293细胞,并将条件培养基与血吸虫童虫一起培养,获得具有明显抑制血吸虫童虫活性的亚基因池E77,按上述方法反复进行筛选,直到获得有抑制作用的单个克隆,该技术的建立为克隆东方田鼠抗日...

• 单位
  中南大学湘雅医学院