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摘要
目的观察羟苯磺酸钙(CaD)对斑马鱼胚胎血管新生的抑制作用及其机制。方法选取斑马鱼胚胎180个,随机分为空白组、高糖组(130 mmol/L葡萄糖)、阳性药+高糖组、高糖+CaD 30μg/mL组、高糖+CaD 60μg/mL组、高糖+CaD 90μg/mL组,其中高糖均为130 mmol/L葡萄糖,阳性药物为浓度500 ng/mL内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)2 mL,CaD各浓度组给予相应浓度的CaD 2 mL。通过参考致死率实验选用3个给药剂量浓度,分别为1/10最大非致死浓度(MNLD)(30μg/mL)、1/5 MNLD(60μg/mL)、3/10 MNLD(90μg/mL)作为毒性指标观察,给予药物暴露液2 m L,连续给药72 h,每24小时更换1次。在体式显微镜下观察并统计斑马鱼胚胎体节间血管指数及镜下荧光点数,荧光定量PCR检测处理后胚胎血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮合酶(NOS)表达,采用ELISA法检测VEGF和NOS含量。结果高糖组的斑马鱼胚胎体节间血管指数、镜下荧光点数及VEGF、NOS m RNA蛋白表达水平高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);阳性药+高糖组及高糖+CaD 90μg/mL、60μg/mL组斑鱼胚胎的体节间血管指数及镜下荧光点数均显著低于高糖组(P<0.01)。对CaD给药组进行组间比较,发现随着CaD给药剂量的增加,斑马鱼胚胎体节间血管指数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖组相比,药物处理后各组斑马鱼胚胎的荧光点数呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性药+高糖组及高糖+CaD 90μg/mL、60μg/mL组VEGF、NOS的mRNA表达水平低于高糖组(P<0.05)。高糖+CaD 30μg/mL组VEGF、NOS的mRNA表达水平与高糖组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。阳性药+高糖组及高糖+CaD 90μg/mL、60μg/mL组的VEGF、NOS蛋白表达水平低于高糖组(P<0.05)。高糖+CaD 30μg/mL组的VEGF、NOS蛋白表达水平与高糖组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CaD具有抑制高糖环境斑马鱼胚胎血管新生的作用,与抑制VEGF/iNOS有关。
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