菠萝质膜水通道蛋白基因AcPIP2-4的克隆、重组载体构建

作者：黄栩; 董乐; 王芳^*; 陈明贤; 麻彤辉; 陈月钗; 邱吕萍; 陈洪彬

来源：内蒙古民族大学学报(自然科学版), 2020, 35(03): 238-244.

DOI：10.14045/j.cnki.15-1220.2020.03.011

• 菠萝
• 质膜水通道蛋白
• 基因克隆
• 载体构建

本研究以菠萝(Ananas comosus (L.) Merrill)果实为材料提取总RNA并合成cDNA.根据菠萝质膜水通道蛋白基因(AcPIP2-4)序列(GenBank登录号:XM020240565.1)设计1对特异性引物,通过RT-PCR从果实cDNA中扩增AcPIP2-4的ORF序列,并将该序列亚克隆至原核表达载体pET32a(+).经酶切鉴定和序列分析,结果表明,原核表达重组载体pET32a(+)-AcPIP2-4构建成功.以重组载体pET32a(+)-AcPIP2-4质粒为模板,通过RT-PCR扩增AcPIP2-4的CDS序列,再将其亚克隆至载体pSP64 Poly(A)上.经酶切鉴定及序列分析,结果表明,重组载体pSP64 Poly(A)-AcPIP2-4构建成功.重组载体pET32a(+)-AcPIP2-4和pSP64 Poly(A)-AcPIP2-4的成功构建,为后续制备抗AcPIP2-4的抗体和AcPIP2-4 c的RNA,进而进行AcPIP2-4的组织表达和功能研究奠定基础.

• 单位
  泉州师范学院