MAVSΔTM基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达定位

作者：杨超玥; 李钰昌; 郑亮; 高鑫誉; 曹宏伟; 吴志军; 张华; 高振秋; 肖莉杰^*

来源：黑龙江八一农垦大学学报, 2023, 35(06): 95-101.

• 真核表达载体
• 线粒体抗病毒信号蛋白
• 跨膜区氨基酸

线粒体抗病毒信号蛋白（mitochondria antiviral signaling protein,MAVS）在脊椎动物的抗病毒免疫反应中起着非常重要的作用。为了后续研究MAVS跨膜区氨基酸在病毒侵染宿主细胞时所发挥的作用，通过基因工程方法，构建了MAVS基因C端跨膜结构域缺失突变体（MAVSΔTM）。首先通过PCR技术扩增MAVSΔTM基因片段，通过无缝克隆技术连接到pcDNA3.0-Flag载体上，后经酶切鉴定及测序结果表明MAVSΔTM基因成功克隆到pcDNA3.0-Flag载体上，并将重组质粒定名pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM。将重组质粒pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM转染至人肾上皮细胞（HEK-293T）细胞中，利用蛋白免疫印迹实验和间接免疫荧光技术检测pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM的表达以及定位情况。结果显示，pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM在293T细胞中成功表达，并且均匀分布于细胞中。研究将为进一步研究MAVS蛋白跨膜区氨基酸的功能奠定基础。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 生命科学技术学院; 动物科技学院; 盐城师范学院