阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响

作者：刘颖; 黄艳艳; 詹宇威; 詹锋^*

来源：安徽医科大学学报, 2022, 57(04): 515-522.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.04.003

• 类风湿关节炎
• CTLA4-Ig
• B7/CD28共刺激通路
• 炎症
• 骨破坏

目的 探讨阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响及可能机制。方法 40只DBA/1小鼠随机分正常对照组、模型组、细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)低剂量组和CTLA4-Ig高剂量组，除正常对照组外，其余三组小鼠均制备类风湿关节炎模型。在二次免疫结束后第0、5、10天CTLA4-Ig低、高剂量组分别腹腔注射50、100 mg/kg CTLA4-Ig,正常对照组和模型组注射等量生理盐水。游标卡尺测定小鼠同侧后足掌厚度，进行关节炎评分；ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-17(IL-17)的水平，Micro-CT扫描采集图像并测量骨组织形态计量学参数，HE染色观察膝关节病理形态变化，TRAP染色检测膝关节组织内破骨细胞，实时荧光定量PCR和Western blot检测骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA及蛋白表达情况，免疫组织化学染色检测核因子κB(NF-κB)表达，Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，经过CTLA4-Ig高剂量治疗后，RA小鼠足肿胀和关节炎评分均降低，血清中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平均降低，膝关节受损程度减小，骨密度(BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积(BV)及骨体积分数(BV/TV)升高，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性细胞数目减少，组织内OPG mRNA与蛋白相对表达量上调，而RANK、RANKL mRNA与蛋白相对表达量均下调，同时，p-p65、p-IκBα蛋白相对表达量降低，NF-κB阳性表达面积减少，差异有统计学意义(P<0.01);通过CTLA4-Ig低剂量治疗后，RA小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-17水平较模型组下降，组织内NF-κB阳性表达面积减少，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CTLA4-Ig阻断B7/CD28通路，对小鼠类风湿关节炎具有明显的治疗作用，可抑制炎性反应，减少骨破坏，并阻止NF-κB信号途径激活。

• 单位
  海南医学院; 海南省人民医院