检测PRRSV及鉴别HP-PRRSV毒株的二重PCR与二重TaqMan荧光定量PCR方法

作者：陈旭; 汤德元^*; 曾智勇; 王彬; 袁盛林; 廖正波; 何松; 周飘; 毛茵茗

来源：中国兽医科学, 2023, 1-13.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0032

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 二重PCR
• 二重TaqMan荧光定量PCR
• 鉴别检测

为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）变异株，利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532～560位氨基酸缺失的特性设计2对引物，优化反应条件建立二重PCR检测方法，同时针对PRRSV M基因和HP-PRRSV Nsp2基因设计特异性引物和探针，优化反应条件建立二重TaqMan荧光定量PCR方法，并评估两种方法的敏感性、特异性、重复性。敏感性试验结果显示：二重PCR方法的检测下限分别为0.058 ng/μL（PRRSV）和4.7 ng/μL（HP-PRRSV）；二重TaqMan荧光PCR方法的检测下限分别为10 copies/μL（PRRSV）和100 copies/μL（HP-PRRSV）。这2种方法与其他猪病病原均不发生非特异性反应，重复性试验结果良好。经131份临床样品检测，可得到PRRSV的阳性率约12.2%（16/131）、HP-PRRSV的阳性率约17.6%（23/131）、二者的混合感染率约8.4%（11/131）。证实，本研究成功建立了二重PCR和二重TaqMan荧光定量PCR检测方法，可为临床上猪繁殖与呼吸综合征的防控提供技术支持。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学