蛋白激酶PKR在HeLa细胞中的过表达及其siRNA干扰的鉴定

作者：吴娜; 赵志荀; 吴国华; 颜新敏; 叶奕优; 李应国; 朱海霞; 李健; 张志东; 张强

来源：黑龙江畜牧兽医, 2016, (09): 43-47.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2016.0764

• 羊痘病毒
• PKR基因
• 真核表达
• siRNA
• HeLa细胞

为了研究双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)信号通路对羊痘病毒复制的影响,试验构建了PKR基因的真核表达载体,并在He La细胞中实现了PKR的过表达;从相关文献中筛选了靶向PKR的2对siRNA,检测其对PKR的干扰效果,以RT-PCR方法扩增PKR基因,克隆入表达载体pc DNA3.1(-)/Myc-His(B),对重组质粒进行双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒或siRNAs分别转染He La细胞,Western-blot检测PKR蛋白的表达水平。结果表明:试验成功构建了PKR基因的真核表达载体pc DNA3.1(-)-PKR,重组质粒在He La细胞中得到了表达;2对siRNA具有较好的干扰效果,其中siRNA1、siRNA2对PKR的干扰效率分别达到76%和52%。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 重庆出入境检验检疫局; 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心