MARCKS基因在前列腺癌细胞中的表达、蛋白定位及对PC-3细胞迁移的影响

作者：尹洪保; 王春玉

来源：基因组学与应用生物学, 2022, 1-13.

• MARCKS
• 质粒构建
• 前列腺癌
• N-肉豆蔻酰化
• 亚细胞定位

本研究旨在检测前列腺癌细胞系中MARCKS基因表达的水平，构建MARCKS基因的表达载体并明确其在细胞中的表达和外源蛋白的亚细胞定位，及检测MARCKS基因过表达对PC-3细胞迁移能力的影响。首先，利用Western Blot检测MARCKS蛋白在多种前列腺癌细胞系内的水平。之后，根据MARCKS蛋白的编码序列设计合成带有N末端或C末端HA标签的引物，PCR扩增目的片段并与载体进行连接，且进行酶切鉴定及测序比对。接着，将序列正确的质粒转染至PC-3细胞中，采用Western Blot检测N-HA-MARCKS和C-HA-MARCKS蛋白并利用免疫荧光染色检测外源蛋白在细胞中的定位。最后，通过Transwell小室实验检测N-HA-MARCKS和C-HA-MARCKS对PC-3细胞迁移能力的影响。本研究构建了带有不同标签位置的MARCKS基因的表达载体，其中C-HA-MARCKS蛋白的分子量更高；且C-HA-MARCKS蛋白在细胞膜上定位更明显；同时，N-HA-MARCKS和C-HA-MARCKS均促进PC-3细胞的迁移能力。本研究结果为MARCKS基因在前列腺癌中的作用及分子机制的深入解析提供了实验基础。

• 单位
  中国医科大学; 生命科学学院