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摘要
背景：Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5是一种调节糖脂代谢的蛋白分子，可以调控细胞凋亡，且参与抑制动脉粥样硬化的进程。目的：通过构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体，转染人脐静脉内皮细胞，验证Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5调控内皮细胞凋亡的作用。方法：构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体。取处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞，分3组培养：空白组不进行慢病毒转染，对照组转染不含Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5基因的空载体慢病毒，实验组转染Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒，转染7 d后，采用RT-PCR和Western blot检测Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达。转染7 d后，向3组细胞内加入氧化型低密度脂蛋白溶液，采用CCK-8法测定细胞活力，Hoechst 33342/PI双染及流式细胞技术检测细胞凋亡程度。结果与结论：(1)实验组Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达均高于空白组、对照组(P <0.05)；(2)CCK-8检测显示，实验组加入氧化型低密度脂蛋白1,2 h的细胞活力高于空白组、对照组(P <0.05),3组加入氧化型低密度脂蛋白4 h的细胞活力比较差异无显著性意义(P> 0.05)；(3)加入氧化型低密度脂蛋白24 h后，流式细胞术检测显示实验组细胞凋亡率低于空白组、对照组(P <0.05),Hoechst 33342/PI双染显示实验组凋亡细胞数量少于空白组、对照组；(4)结果表明，过表达Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5可以抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡。
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