精子碱性单细胞凝胶电泳法优化条件的建立及效果分析

作者：邓爽; 范烺; 伍细言; 朱燕; 徐克前

来源：中华男科学杂志, 2015, 21(02): 124-131.

DOI：10.13263/j.cnki.nja.2015.02.005

• 精子
• DNA损伤
• 精子DNA碎片
• 碱性单细胞凝胶电泳

目的:探讨精子碱性单细胞凝胶电泳法(SCGE)的主要影响因素,并优化条件,以利于标准化。方法:采用不同浓度H2O2处理精子,碱性SCGE检测精子DNA碎片(SDF),探讨凝胶层数、DNA解旋及电泳时的p H、DNA解旋及电泳时间、计数精子数对结果的影响,分析优化后方法的重复性,并用于检测40例精液标本。结果:3层琼脂糖凝胶可降低本底,DNA解旋及电泳缓冲液最佳p H值为10,最佳DNA解旋及电泳时间分别为40 min和30 min,计数50个精子即可保证结果的可靠性。优化后的碱性SCGE,用尾部DNA含量百分比表示,其批内、批间变异系数(CV)分别为3.12%、7.13%,用DNA损伤得分表示,其批内、批间CV分别为2.38%和6.09%。与健康生育男性相比,少弱畸形精子症不育男性精液SDF显著升高(P<0.05)。结论:优化后的精子碱性SCGE,重复性好,易于标准化,可用于不育男性SDF检测,适合在临床推广应用。

• 单位
  中南大学湘雅医学院; 湖南省妇幼保健院