人巨细胞病毒包膜糖蛋白B主要中和表位单克隆抗体的制备

作者：何赛; 廖旻晶; 靳晓瑞; 邱义兰; 李晓丹; 郑姣; 唐娜; 罗焕; **辉; 郭向荣; 刘如石

来源：生命科学研究, 2017, 21(01): 16-22.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2017.01.004

• 人巨细胞病毒(HCMV)
• 包膜糖蛋白B(gB)
• 中和表位
• 单克隆抗体(mAb)
• 酶联免疫吸附反应(ELISA)
• 免疫反应性

人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒;用IPTG诱导表达重组蛋白,采用Western-blot进行特异性鉴定;将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,然后筛选制备AD13单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)。12%SDS-PAGE电泳鉴定表明重组蛋白表达成功,其相对分子质量约为35 kD;Western-blot和间接ELISA结果说明,重组AD13蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性;克隆化后筛选到5个AD13单克隆抗体细胞株,经间接ELISA鉴定,与AD13抗原有良好的特异性反应。上述研究为研发HCMV快速诊断试剂盒提供了原料,也为研究HCMV亚单位疫苗提供了相关的基础。

• 单位
  湖南师范大学; 中南大学湘雅医院; 生命科学学院