RNA干扰沉默c-Met对喉鳞癌细胞生物学行为影响

作者：曹峰; 曹磊; 张建军; 范才; 陈坤; 张翠红^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2020, 27(13): 1034-1039.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2020.13.03

• 喉鳞癌细胞
• c-Met基因
• 肿瘤增殖
• 迁移
• 调控机制

目的近年来细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal to epithelial transition factor,c-Met)基因在恶性肿瘤的防治研究中越来越受到关注,本研究旨在探讨c-Met基因对喉鳞癌细胞Hep-2增殖和迁移的影响。方法利用小干扰RNA技术构建低表达c-Met的喉癌细胞株Hep-2。实验分为siRNA干扰组、阴性对照组(转染阴性干扰片段)和空白对照组(细胞不做处理)。利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerse chain reaction,qRT-PCR)检测喉鳞癌细胞Hep-2中c-Met表达含量;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测c-Met基因对喉癌细胞增殖的影响;应用细胞划痕实验检测c-Met基因对喉癌细胞迁移能力的影响。采用SPSS 25.0对数据进行统计学分析,多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两多重比较采用LSD法。结果 qRT-PCR检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组Hep-2细胞中c-Met mRNA的相对表达量分别为1.00±0.00、0.94±0.05和0.42±0.03,3组c-Met mRNA表达均值差异有统计学意义,F=326.9,P<0.000 1;两两多重比较结果显示,空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义,P=0.07。蛋白质印迹法检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组Hep-2细胞中c-Met蛋白的相对表达量分别为100.00±0.00、117.04±10.56和61.98±15.95,3组c-Met蛋白表达均值差异有统计学意义,F=19.54,P=0.002 4;两两多重比较结果显示,空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义,P=0.108。MTT法检测结果显示,转染24h后,空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组Hep-2细胞吸光度(A)值分别为0.620±0.010、0.600±0.011和0.440±0.046,3组Hep-2细胞A值均值差异有统计学意义,F=37.980,P=0.000 4;两两多重比较结果显示,空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义,P=0.808 3。转染48h后,空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组Hep-2细胞A值分别为1.083±0.038、1.040±0.010和0.643±0.061,3组Hep-2细胞A值均值差异有统计学意义,F=100.500,P<0.000 1;两两多重比较结果显示,空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义,P=0.425 6。细胞划痕实验结果显示,空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组Hep-2细胞划痕修复率分别为(53.381±2.616)%、(54.223±1.935)%和(13.542±0.104)%,3组细胞划痕修复率均值差异有统计学意义,F=458.9,P<0.000 1;两两多重比较结果显示,空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义,P>0.999 9。结论下调c-Met基因表达能够引起喉鳞癌细胞生物学行为的改变,抑制细胞增殖及细胞迁移,从而在一定程度上抑制肿瘤的发生、发展。

• 单位
  河北省人民医院; 河北医科大学第四医院