柱前衍生-稳定同位素标记-超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱法测定血清中25-羟基维生素D

作者：韩枫; 王雨昕; 李敬光; 李孜孜; 慕迪; 何丽^*; 张坚

来源：卫生研究, 2023, 52(01): 129-135.

DOI：10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2023.01.022

• 超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱
• 25-羟基维生素D3
• 25-羟基维生素D2
• 衍生化

目的 建立快速、准确检测血清中25-羟基维生素D3[25-hydroxyvitamin D3,25(OH)D3]、25-羟基维生素D2[25-hydroxyvitamin D2,25(OH)D2]含量的柱前衍生-稳定同位素标记-超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱的方法，并用此方法诊断维生素D缺乏症，评估人群维生素D营养状况。方法 加入同位素内标的血清样品采用乙酸乙酯-正己烷溶液(2∶1,V/V)提取，离心后氮气吹干，以4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione, PTAD)作为衍生化试剂与目标化合物进行衍生化反应。反应产物采用BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm, 1.7μm)进行分离，以0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱。质谱采用电喷雾正离子模式和平行反应监测对目标物进行检测，内标法定量。结果 25(OH)D3和25(OH)D2的检出限为0.01 ng/mL,定量限为0.03 ng/mL。25(OH)D2浓度的线性范围为0.5～40.0 ng/mL,25(OH)D3浓度的线性范围为2.5～200.0 ng/mL,二者在浓度范围内线性良好，相关系数(r2)大于0.995。25(OH)D3和25(OH)D2的回收率分别为95.7%～101.3%和98.7%～108.6%,相对标准偏差分别为0.5%～4.9%和2.2%～3.4%(n=5)。测定参考物质NIST SRM 972a的Level 2血清中25(OH)D3和25(OH)D2的准确度分别为104.8%和94.9%。利用该方法检测北京市116名孕妇孕早期血清中25(OH)D3和25(OH)D2水平[M(P25,P75)]分别为25.7(20.8,32.6)ng/mL和0.8(0.4,1.1)ng/mL。结论 本方法灵敏度高、定性准确，适用于人群维生素D营养状况的评价和监测。

• 单位
  中国疾病预防控制中心营养与健康所; 国家食品安全风险评估中心