香青兰有效部位对OGD/R损伤诱导的人脑微血管内皮细胞程序性坏死的作用机制研究

作者：杨志航; 王雪萌; 徐磊; 苏文灵; 卡德尔业·卡德尔; **; 郑瑞芳^*; 邢建国^*

来源：药学学报, 2022, 57(02): 409-418.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2021-0855

• 香青兰有效部位
• 脑缺血再灌注损伤
• 氧糖剥夺/复氧
• 程序性坏死
• 混合谱系激酶结构域样蛋白
• 线粒体膜通透性转换孔

本研究旨在探讨香青兰有效部位(effective parts of Dracocephalum moldavica, EPDM)通过抑制程序性坏死通路对缺血再灌注损伤人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells, HBMECs)的保护作用和分子机制。泛半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK联合氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/re-oxygenation, OGD/R)损伤建立HBMECs程序性坏死模型,以模拟脑缺血再灌注损伤过程。细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测细胞活力; Hoechst 33342/PI荧光双染检测细胞程序性坏死率;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量;采用2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯探针、钙黄绿素乙酰甲酯和JC-1探针分别检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)、线粒体膜通透性转化孔(mitochondrial permeability transition pore, MPTP)开放情况以及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP);酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)释放情况;免疫印迹法检测程序性坏死相关蛋白表达。结果表明,与对照组比较, Z-VAD-FMK联合OGD/R可使HBMECs活力下降,程序性坏死率升高, LDH释放增加, ROS产生增多, MPTP开放, MMP降低,TNF-α、IL-1β以及IL-6分泌增加,受体相互作用蛋白3 (receptor interacting protein kinase 3, RIP3)和线粒体丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5 (phosphoglycerate mutase 5, PGAM5)表达升高,磷酸化混合系结构域样蛋白(phospho-mixed lineage kinase domain-like protein, p-MLKL)/MLKL比值升高;而EPDM预保护可部分逆转这些因素的变化。上述结果表明, EPDM可能通过抑制RIP3/MLKL/PGAM5通路和MPTP开放以保护线粒体功能,进而使HBMECs免受脑缺血再灌注损伤,可为EPDM治疗脑缺血性相关疾病提供有价值的科学依据。

• 单位
  新疆药物研究所; 中国药科大学; 石河子大学