猪肺炎支原体HN0613株高密度发酵工艺研究及效力评价

作者：刘鹏; 李鹏昊; 张翼; 朱巧燕; 李向东; 黄玉欣^*; 田克恭^*

来源：畜牧与饲料科学, 2018, 39(11): 10-23.

DOI：10.16003/j.cnki.issn1672-5190.2018.11.003

• 猪肺炎支原体HN0613株
• 培养滴度
• 高密度发酵
• 免疫效力

旨在建立猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)HN0613株高密度发酵工艺技术。以培养滴度(CCU)作为考查指标,确定Mhp HN0613株的最佳活力代次以及复苏培养时间;通过四因素三水平正交试验筛选最佳基础培养基配方;以通气量、搅拌转速和接种百分比作为单因素考查指标,优化15 L发酵工艺参变量,并确定700 L高密度发酵放大工艺;按照确定的高密度发酵工艺技术,制备Mhp HN0613株灭活疫苗,评价其对兔和仔猪的免疫效力。结果表明,Mhp HN0613株F11代较其他代次CCU水平高,可达1×109CCU/mL,为最佳活力代次;其在复苏72 h后,pH值降为7.0左右,CCU水平达到最高,为1×109CCU/mL,为最佳复苏培养时间;培养体系中,2%的初始葡萄糖添加量、8%接种百分比、初始培养基p H值7.6、15%猪血清添加量为最适培养条件;通气量100 L/h、搅拌转速300 r/min和8%接种百分比条件最有利于Mhp HN0613株15 L发酵培养;首次建立了平衡kLa联动pH值回调的工艺技术路线,并将优化后发酵罐搅拌叶轮结构改为推进式叶轮,降低了叶轮对菌体的剪切作用力,CCU较优化前提高了10倍,且培养周期较优化前缩短了23 d;700 L高密度发酵放大工艺中,Mhp HN0613株培养滴度不低于5×109CCU/mL,最高可达1×1010CCU/mL;免疫兔血清抗体效价均不低于1∶40,最高可达1∶160;免疫组实验仔猪肺炎减少率均高于80%,临床观察精神及食欲未见异常。该研究为Mhp疫苗规模化发酵生产提供了一定的理论依据。