E74样因子5过表达抑制结肠癌细胞生物学行为的体内外实验研究

作者：马骏; 陈树军^*; 秦阳; 张玉英; 孙晓峰

来源：四川大学学报（医学版）, 2021, 52(03): 430-437.

• E74样因子5
• SW480细胞
• 细胞转染
• 侵袭能力
• 裸鼠

目的探讨E74样因子5(ELF5)过表达对结直肠癌细胞的生长和侵袭能力以及裸鼠成瘤的影响。方法人结直肠癌SW480和HT-29细胞分为5组:LV-GFP组,转染空载体LV-GFP慢病毒;LV-ELF5组,转染重组LV-ELF5慢病毒;shRNA-NC组,转染空载体shRNA-NC慢病毒;shRNA-ELF5组,转染重组shRNA-ELF5慢病毒;对照组,未转染任何载体。转染72 h后,取含有慢病毒的细胞上清液,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中ELF5的mRNA表达水平;Western blot检测ELF5、凋亡相关的cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9、侵袭相关的E-cadherin和Ncadherin的蛋白表达水平;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;TUNEL实验检测组织中细胞凋亡;免疫组化检测组织中E-cadherin、N-cadherin的表达。将20只BALB/c裸鼠分为4组,每组5只:LV-GFP组、shRNA-NC组、LV-ELF5组、shRNA-ELF5组,于裸鼠皮下注射含重组慢病毒的SW480细胞上清液,构建裸鼠成瘤模型,监测移植瘤体积变化。第30天取裸鼠移植瘤组织,测量肿瘤质量,Western blot检测移植瘤ELF5蛋白的表达,TUNEL染色检测移植瘤凋亡,免疫组化检测移植瘤中N-cadherin阳性表达。结果与对照组细胞比较,两个细胞系LV-GFP组和shRNA-NC组细胞的各指标差异无统计学意义。Western blot结果与RT-qPCR结果表明,两个细胞系LV-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均上调(P<0.05,与LV-GFP组比较),shRNA-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05,与shRNA-NC组比较),ELF5过表达体系和干扰体系构建成功。与LV-GFP组比较,LV-ELF5组降低了细胞活力和克隆形成率(P<0.05),促进SW480细胞凋亡,并上调cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达(P<0.05),抑制细胞侵袭,并上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达(P<0.05);ELF5干扰后,细胞的上述表现呈相反趋势(P<0.05,shRNA-ELF5组与shRNA-NC组比较)。体内实验结果表明,ELF5过表达缩小裸鼠肿瘤体积和降低肿瘤质量(P<0.05),促进组织中细胞凋亡(P<0.05),ELF5蛋白表达增加,抑制N-cadherin蛋白表达(P<0.05)。当EFL5表达抑制,上述实验结果呈相反趋势。结论体内外实验表明ELF5过表达可促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞的生长和侵袭。

• 单位
  沈阳医学院附属中心医院