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摘要
目的 应用CRISPR/Cas9构建携带人源化CYP4V2突变的小鼠模型，为遗传性视网膜变性提供与临床疾病病变特征相一致的模式动物。方法 应用生物信息学方法，分析现有CYP4V2中我国眼遗传病患者常见突变热点，并根据其致病性以及序列比对，最终选定突变位点。按照tild-CRISPR的方法，构建供体质粒，以及Cas9系统。最后将供体、Cas9mRNA以及gRNAs注射到小鼠受精卵中，测序鉴定是否构建成功。结果 通过gnomAD以及ClinVar数据库，筛选CYP4V2常见的热点突变，经过序列比对，最终选定CYP4V2c.1091-2 A>G为后续构建模型的致病突变。最终，DNA测序支持构建完成的基因编辑鼠在CYP4V3 1091-2的位置发生了A>G的突变。m RNA水平不能确定是否发生可变剪切。结论 我们利用CRISPR/Cas技术，成功制备了携带患者特异性遗传突变的小鼠模型，为以后深入探索CYP4V2 1091-2 A>G点突变的致病机制以及开发相应的基因治疗药物奠定了基础。
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单位中国科学院; 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院
