微小RNA-143诱导胃癌细胞株BGC-823凋亡机制的探讨

作者：霍中华; 张晓燕; 邱彦; 刘菲菲

来源：海军医学杂志, 2015, 36(06): 502-507.

DOI：10.3969/j.issn.1009-0754.2015.06.012

• B淋巴细胞瘤-2
• 胃癌细胞株
• 微小RNA-143
• 凋亡

目的探讨微小RNA-143(miRNA-143)诱导胃癌细胞BGC-823产生凋亡的机制。方法生物信息学预测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,bcl-2)3’非编码区(untranslation region,UTR)是否存在miRNA-143的结合位点;荧光定量及免疫印迹方法检测胃癌细胞株(BGC-823)及正常胃黏膜细胞株(GES-1)中Bcl-2 mRNA及其蛋白含量;荧光素酶报告基因法验证结合位点;化学法合成miRNA-143-mimics、inhibitor及NC序列并转染BGC-823细胞,转染后48 h收集细胞、蛋白质印迹法检测细胞内Bcl-2蛋白含量;实时定量PCR检测转染后不同时间点BGC-823细胞内miRNA-143含量变化,同时流式法检测BGC-823细胞凋亡。结果与GES-1细胞比较,BGC-823细胞中Bcl-2蛋白含量及miRNA-143含量差异有统计学意义(P<0.01);miRNA-143-mimics、miRNA-143-inhibitor与野生型荧光素酶报告基因共转染组可以明显抑制或者增强荧光素酶活性,转染后48 h,组间酶活性差异有统计学意义(P<0.05),miRNA-143-mimics和miRNA-143-inhibitor转染对突变型荧光素酶报告基因活性无明显影响,差异无统计学意义(P>0.05);BGC-823细胞转染miRNA-143-mimics和miRNA-143-inhibitor能够明显抑制或者促进细胞内Bcl-2蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-143-mimics和miRNA-143-inhibitor转染细胞能够明显引起细胞内miRNA-143含量的改变,转染后48 h,miRNA-143-mimics转染组细胞内miRNA-143含量明显上升,miRNA-143-inhibitor转染组细胞内miRNA-143含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),阴性对照转染对照组和转染对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);细胞凋亡检测结果表明,miRNA-143表达量的升高能够明显引起BGC-823细胞的凋亡,基因干预组与转染对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-143通过抑制Bcl-2基因表达,可引起胃癌细胞株BGC-823细胞产生凋亡。

• 单位
  解放军第四五四医院