Beclin1基因siRNA慢病毒载体构建和鉴定

作者：王文玉; 赵国强; 周云; 樊红琨; 伍钢

来源：生物医学工程学杂志, 2013, 30(01): 131-135.

• Beclin1基因
• siRNA慢病毒载体
• RNA干扰
• A549细胞

本研究通过慢病毒载体(pRNAT-U6.2/Lenti)构建靶向Beclin1基因的RNA干扰(RNAi)重组体,用以建立Beclin1基因稳定沉默的非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株。PCR鉴定结果显示3个扩增的阳性片段均已插入pRNAT-U6.2/Lenti载体;测序结果证明3个重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/Lenti-si356、pRNAT-U6.2/Lenti-si423和pRNAT-U6.2/Lenti-si684的插入序列完全正确;重组慢病毒载体感染A549细胞后,RT-PCR和Westernblot检测结果均证实3组重组体感染的细胞内Beclin1mRNA和蛋白表达都受到不同程度的抑制,Beclin1mRNA的沉默效率分别为35.56%、89.22%和66.78%。结果显示成功构建了Beclin1基因的RNAi病毒重组载体,并建立了其稳定表达的NSCLC A549细胞株,为探讨Beclin1基因对NSCLCA549细胞生物学行为的影响提供了新的细胞模型。

• 单位
  联合医院; 郑州大学; 基础医学院; 华中科技大学同济医学院; 河南省人民医院