实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数

作者：宣姚吉; 周祥山; 张元兴

来源：中国生物制品学杂志, 2009, (12): 1236-1239+1243.

DOI：10.13200/j.cjb.2009.12.82.xuanyj.008

• 实时荧光定量PCR
• 毕赤酵母
• 基因拷贝数 Real-time fluorescent quantitative PCR
• Pichia pastoris
• Gene copy number

目的建立实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的方法。方法采用双标准曲线法,分别利用含有GAP基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,建立标准曲线。将含有外源GFP基因的毕赤酵母基因组进行实时荧光定量PCR,通过标准曲线计算出外源GFP基因在毕赤酵母基因组中的拷贝数。结果毕赤酵母GAP基因Ct值与起始拷贝数对数的回归方程为:y=-3.612x+39.28,GFP基因Ct值与起始拷贝数对数的回归方程为:y=-3.544x+37.99,GAP基因和GFP基因的反应效率分别为0.89和0.90,两条标准曲线的相关系数均为0.999,且均有良好的重复性。检测1...