宿主蛋白Rab11a对牛病毒性腹泻病毒复制的影响

作者：权冉; 葛丽娟; 陈俊贞; 袁圆圆; 付强; 史慧君

来源：中国动物传染病学报, 2022, 1-9.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20220516.001

• Rab11a
• 牛病毒性腹泻病毒
• CRISPR/Cas9
• 复制

为了探索宿主蛋白Rab11a在感染牛病毒性腹泻病毒（BVDV）后，对细胞增殖的影响。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Rab11a基因稳定敲除的MDBK细胞株，设计靶向Rab11a基因的向导RNA表达载体，采用Western blot检测Rab11a基因敲除后的蛋白表达情况；使用实时荧光定量qPCR、免疫荧光染色试验、Reed-Muench法等技术检测BVDV感染Rab11a KO细胞后病毒RNA水平、双链RNA（dsRNA）积累水平、病毒滴度及致细胞病变（CPE）情况等。Western blot检测结果显示，成功构建出Rab11a基因敲除的细胞Rab11a KO；Rab11a基因敲除显著抑制BVDV 5’UTR mRNA和dsRNA水平的积累，感染36 h后，Scramble细胞明显有大量细胞病变，出现皱缩、碎裂、形成空泡后脱落等现象，Rab11a KO细胞的CPE现象明显低于Scramble细胞；在BVDV感染细胞12 h后，与Scramble细胞相比，Rab11a KO细胞的病毒滴度显著性降低。综上作述，结果证明了敲除MDBK细胞的Rab11a基因对BVDV在胞内复制起到抑制作用。本研究结果了解了宿主蛋白Rab11a与BVDV的相互作用，以及Rab11a对病毒的复制增值的作用提供了新的科学依据。

• 单位
  新疆农业大学