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摘要
目的：为建立一种叠氮溴化丙锭（Propidium Monoazide,PMA）与实时定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time Polymerase Chain Reaction,qPCR）联用的快速检测扩展青霉活菌方法。方法：通过优化PMA处理浓度、黑暗孵育及曝光时间，筛选扩展青霉特异性引物，结合qPCR技术，建立一种基于PMA-qPCR联用快速检测扩展青霉活菌的方法，构建定量标准曲线，应用于人工污染的苹果样品中活菌的检测，与平板菌落计数比较评估该方法的可靠性。结果：PMA处理浓度10μg/mL、黑暗孵育5 min、曝光10 min为最佳PMA处理条件。4种引物中Pexp-patF对扩展青霉具有极强的特异性，可作为引物用于PMA-qPCR检测。构建的定量标准曲线的R2=0.9948，最低检测限为102.6 CFU/mL，方法检测结果与平板菌落计数无明显差异，并发现在苹果的未腐烂部分中可检测出扩展青霉活菌。结论：研究建立的PMA-qPCR技术可应用于苹果中扩展青霉活菌的检测，为扩展青霉精准防控提供一定技术支撑。
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