堆型艾美耳球虫外分泌蛋白致细胞损伤研究

作者：王黎霞; 黄芳; 张建军; 安健^*

来源：北京农学院学报, 2021, 36(01): 100-104.

DOI：10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2021.0118

• 堆型艾美耳球虫
• 体外培养
• 外分泌蛋白
• 细胞损伤

【目的】研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)外分泌蛋白是否具有外毒素和致细胞损伤作用。【方法】将牛肾传代细胞与E.acervulina子孢子共培养2.5 h,更换无血清培养液,每间隔12 h收集入侵后0～60 h的该时间点前12 h所有培养液并透析浓缩,SDS-PAGE和Western Blot检测,确定E.acervulina的外分泌蛋白,将此蛋白加培养液培养牛肾传代细胞,利用吖啶橙和碘化丙啶染色,判断细胞损伤。【结果】E.acervulina分泌约70 kD的蛋白,12～24 h分泌蛋白最多,24～36 h蛋白分泌量明显下降,36～48 h以后几乎看不到蛋白带,0～12 h和48～60 h看不到外分泌蛋白,用含该蛋白的培养液培养牛肾传代细胞,细胞膜和核膜的通透性增加,【结论】E.acervulina第一代裂殖生殖时分泌约70 kD的蛋白,该蛋白损伤细胞膜和核膜,证明该蛋白具有球虫毒素的功能。

• 单位
  北京农业职业学院; 北京农学院