科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
背景:目前发现低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1,HIF1α)可提高组织和细胞在缺血环境下继续生存的能力,在促进血管再生方面有重要意义。目的:构建三点突变型HIF1α联合示踪因子hrGFP双基因重组腺病毒载体Ad-CMV-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1,研究其对骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法:将第3代骨髓间充质干细胞分组培养,实验组以突变基因Ad-CMV-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1病毒液转染细胞,阳性对照组以未突变基因Ad-CMV-HIF1α-IRES-hrGFP-1病毒液转染细胞,阴性对照组以Ad-CMV-IRES-hrGFP-1空病毒液转染细胞,空白对照组不转染任何病毒液。转染72 h后,进行HIF1α基因mRNA及蛋白检测;转染24,48,72,96,120 h,MTT法检测细胞增殖。结果与结论:(1)HIF1α基因mRNA检测:实验组、阳性对照组HIF1α基因mRNA表达高于阴性对照组、空白对照组(P<0.05),其余组间两两比较差异无显著性意义;(2)HIF1α蛋白检测:实验组细胞中HIF1α蛋白表达高于阳性对照组、阴性对照组、空白对照组(P<0.05),后3组间比较差异无显著性意义;(3)细胞增殖:阳性对照组与空白对照组细胞生长速度均较慢,两组间相比较无显著性意义;实验组细胞增殖程度高于阳性对照组、空白对照组(P<0.05);(4)结果表明,重组腺病毒介导的三点突变型HIF1α联合hrGFP基因转染骨髓间充质干细胞后,不仅可在常氧条件下持续表达目的蛋白HIF1α,同时也可促进骨髓间充质干细胞的增殖。
- 单位
