一种肠道病毒D68型感染性克隆的构建方法

作者：李凯琳; 相子春^*

来源：国际病毒学杂志, 2018, 25(02).

• 肠道病毒D68型
• 转染
• RD细胞
• 感染性克隆

目的构建肠道病毒D68型(EV-D68) cDNA感染性克隆。方法利用聚合酶不完全引物延伸(Polymerase Incomplete Primer Extension,PIPE)法分别扩增EV-D68基因组cDNA片段与pBR322载体,得到的片段连接后测序,连接产物测序正确后作为载体与EV-D68的基因组的第2段扩增连接。以此类推,边扩增边连接,并测序,直到全基因组全部连接到pBR322上,在EV-D68基因组前面插入T7启动子后,经体外转录后的RNA转染RD细胞,转染后显微镜下连续观察是否出现细胞病变,并利用EV-D68的VP1特异性抗体进行免疫印迹确认。结果转染后24 h在显微镜下可以观察到典型的肠道病毒细胞病变,病变细胞裂解液的免疫印迹得到特异的EVD68的VP1条带,这些结果显示包装出EV-D68病毒,这些包装的病毒经传代实验显示可以连续传代。结论成功构建EV-D68cDNA感染性克隆。

• 单位
  中国医学科学院病原生物学研究所; 北京协和医学院