大鼠肝细胞系lncRNA NONRATT021477.2过表达及干扰表达条件优化

作者：牛春阳; 薛琳琳; 詹雪龙; 徐晶; 邵子益; 郭景茹; 甄莉; 计红^*; 李士泽; 杨焕民

来源：中国兽医学报, 2020, 40(08): 1560-1565.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.08.21

• lncRNA NONRATT021477.2
• 慢病毒过表达
• ASO干扰
• BRL细胞

试验分别以带有目的基因的重组慢病毒质粒(pSllV-CMV-zsGreen-puro-lncRNA77.2)和3条反义核苷酸质粒转染BRL细胞,根据绿色荧光蛋白(GFP)表达情况评估转染效率;优化过表达慢病毒的最佳感染复数,并通过嘌呤霉素筛选以得到高表达稳转株。应用荧光定量PCR方法检测lncRNA NONRATT021477.2的表达量,验证过表达效果及初步确定干扰效率最高的质粒,并进一步优化ASO质粒的转染浓度和时间曲线。结果显示,重组慢病毒以感染复数(MOI)=4转染BRL细胞48 h时,lncRNA NONRATT021477.2表达量比空病毒NC组极显著升高(P<0.01),过表达效果为17倍,成功获得高表达稳转株;并且确定了干扰质粒ASO-2以250 nmol/L浓度转染BRL细胞24 h时,对靶基因水平的干扰效率最高,为78%。本试验建立了lncRNA NONRATT021477.2过表达和干扰表达质粒转染BRL细胞的最佳条件,为后续深入研究lncRNA NONRATT021477.2的生物学功能奠定基础。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 黑龙江职业学院; 动物科技学院