温肾养肝汤对MPTP所致帕金森病多巴胺能神经元损伤保护的分子机制研究

作者：徐成成; 陆艳; 唐莉莉; 梁艳; 赵杨^*

来源：南京中医药大学学报(自然科学版), 2022, 38(02): 122-128.

DOI：10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0122

• 温肾养肝汤
• 帕金森病
• 多巴胺能神经元
• 线粒体自噬
• PINK1/Parkin

目的 探讨温肾养肝汤保护多巴胺(Dopamine, DA)能神经元，延缓帕金森病(Parkinson’s disease, PD)进程的作用机制。方法 将50只小鼠随机分为正常组，模型组，温肾养肝汤高、低剂量组，金刚烷胺组，每组10只，除正常组外，其余组小鼠腹腔注射30 mg·kg-1 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),每周2次，连续4周，建立MPTP致小鼠PD模型，灌胃温肾养肝汤，每日1次，连续3周。观察PD小鼠的行为学变化；免疫组化和尼氏染色法检测DA能神经元细胞数；HPLC法检测病理组织中DA、3,4-二羟基苯乙酸(3,4-Dihydroxyphenylacetic acid, DOPAC)和高香草酸(Homovanillic acid, HVA)含量；比色法测定小鼠黑质线粒体中ATP酶(ATPase)、线粒体呼吸链复合物Ⅰ(ComplexⅠ)活性；Western blot测定PINK1、Parkin、VDAC1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白相对表达量。结果 行为学检测显示，与模型组相比，温肾养肝汤能明显改善小鼠的肌肉力量和运动平衡(P<0.01),延长小鼠在滚筒上的时间(P<0.01);免疫组化显示，温肾养肝汤高剂量组可观察到大量酪氨酸氢化酶(Tyrosine hydrogenase, TH)免疫反应呈阳性的细胞，明显的细胞突起，与尼氏染色结果一致，同时小鼠纹状体中DA和HVA含量明显提高(P<0.05,P<0.01);黑质线粒体酶活性和自噬通路相关蛋白研究显示，高剂量温肾养肝汤能明显提高ATPase和ComplexⅠ活性(P<0.01),同时还能上调模型小鼠的PINK1(P<0.05)、Parkin(P<0.01)、LC3Ⅱ/Ⅰ(P<0.01)蛋白表达，抑制P62蛋白表达(P<0.01)。结论 温肾养肝汤通过提高线粒体功能，激活PINK1/Parkin介导的线粒体自噬过程来保护DA能神经元，改善PD模型小鼠行为学功能障碍，延缓PD进程。

• 单位
  南京市中医院; 南京中医药大学