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摘要
目的·探讨真核细胞中组蛋白H3K14M突变对嗜肺军团菌分泌的甲基转移酶RomA活性的影响及其内在机制。方法·构建组蛋白H3野生型(H3WT)以及组蛋白H3上14位赖氨酸突变为甲硫氨酸、异亮氨酸、精氨酸(H3K14M、H3K14I、H3K14R)的真核表达质粒,慢病毒包装并感染稳定表达RomA的293T、THP-1等细胞。用Western blotting检测并比较带有不同H3K14突变的细胞中内源H3K14位点表观修饰的改变。并利用免疫共沉淀技术检测H3K14M与RomA蛋白的相互作用。结果·嗜肺军团菌的分泌效应物RomA通过靶向宿主细胞核,增加其H3K14甲基化水平同时降低H3K14乙酰化水平,从而抑制宿主基因的表达,促进嗜肺军团菌有效的细胞内复制;但组蛋白H3K14M突变可以通过增强与RomA蛋白的相互作用以抑制其甲基转移酶活性,阻断RomA对H3K14位点的甲基化。结论·组蛋白H3K14M突变显著抑制嗜肺军团菌来源甲基转移酶RomA活性。
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单位上海交通大学; 基础医学院
