荷载特异性核基质结合区结合蛋白-1基因短发卡RNA的溶瘤腺病毒联合多西他赛对人乳腺癌细胞增殖和侵袭力的影响

作者：丁猛; 潘俊; 于海元; 刘渠贺; 毛立军^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(10): 1845-1848.

• 特异性核基质结合区结合蛋白-1
• 乳腺癌
• 多西他赛
• 侵袭
• 迁移

目的观察携带特异性核基质结合区结合蛋白-1 (SATB1)基因短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-SATB1)联合化疗药物多西他赛(DOC)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭力的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为5组进行干预,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)组、DOC组(1×10-6ml/L)、病毒组(ZD55-SATB1)[转染倍数(MOI)=10]、荷载增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)的病毒对照组ZD55-EGFP(10 MOI)、病毒ZD55-SATB1联合DOC组(10 MOI+1×10-6mol/L)。细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定单独给药DOC(1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L)、单独感染病毒ZD55-SATB1 (0、0.1、1.0、10.0、100.0MOI)MDA-MB-231细胞96 h后细胞生存率,与5实验组干预MDA-MB-231细胞48 h后细胞存活率;划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭力;Western blot检测早期区1A基因(E1A)、SATB1及细胞侵袭相关蛋白:上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达。结果 CCK-8法结果显示10 MOI的ZD55-SATB1联合DOC(1×10-6 mol/L)干预MDA-MB-231细胞48 h后存活率为(35.16±2.17)%,与ZD55-SATB1组(58.26±2.02)%(P=0. 015)、ZD55-EGFP组(71. 25±3.49)%(P=0.023)、DOC组(50.16±3.17)%(P=0. 018)比较,差异有统计学意义;划痕实验的结果显示10 MOI的ZD55-SATB1联合DOC(1×10-6 mol/L)干预MDA-MB-231细胞细胞48 h后,与相当剂量的ZD55-SATB1 (10 MOI)、ZD55-EGFP(10 MOI)、DOC(1×10-6 mol/L)比较,迁移能力显著降低;Transwell实验结果表明,ZD55-SATB1联合DOC组干预MDA-MB-231细胞细胞48 h后的细胞穿膜数为(356.2±101.5),与ZD55-SATB1组(576.1±89.4)(P=0. 035)、ZD55-EGFP组(935. 2±201. 3)(P=0.027)、DOC组(878.4±178.7)(P=0. 016)比较,其侵袭力显著降低;Western blot结果表明,病毒ZD55-SATB1、ZD55-EGFP可在细胞中高效复制,且DOC不影响腺病毒的复制;ZD55-SATB1联合DOC高效抑制SATB1的表达,同时MMP-2、Vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加(P=0.000)。结论携带靶向SATB1基因shRNA的溶瘤腺病毒ZD55-SATB1对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖起到抑制作用,并且抑制细胞的迁移侵袭;ZD55-SATB1与DOC联合应用后,可协同抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖及侵袭能力。

• 单位
  徐州医学院附属医院