水稻CRISPRa系统的优化及验证

作者：杨柳; 姚毅菲; 刘林丽; 苏颜琦; 刘华伟^*

来源：西北农业学报, 2023, 32(10): 1587-1593.

• 基因激活
• CRISPRa
• 水稻
• 原生质体

CRISPR激活(CRISPR activation, CRISPRa)是通过dCas9-sgRNA复合体融合或招募转录激活域至启动子区以增强基因转录的CRISPR衍生技术。为提高水稻CRISPRa系统特异性及其激活效率，设计点突变引物将dCas9突变为特异性更强的HFdCas9,同时采用2×35S启动子表达密码子优化的水稻HFdCas9-TV。通过将HFdCas9-TV质粒和sgRNA质粒共转染水稻原生质体，基于 OsGW7和 OsF3H的相对表达量变化检测所构建的CRISPRa系统激活效率。结果表明，该系统可激活 OsGW7至对照组的95倍，为CCTV系统的2.2倍；可同时激活 OsGW7、 OsF3H表达量分别至对照组的33倍和26倍。该系统的建立为开发特异性更强、效率更高的植物CRISPRa系统奠定前期试验基础，为水稻及其他作物分子育种提供“多重加法”的技术方案。

• 单位
  生命科学学院; 西北农林科技大学