钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ RNA干扰载体构建及对破骨细胞分化和骨吸收的影响

作者：王艺睿; 王会; 戚孟春^*; 董伟; 冯晓洁; 孙红

来源：实用医学杂志, 2019, 35(04): 557-561.

• 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ
• 破骨细胞
• RNA干扰
• 慢病毒

目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响。方法构建3个CaMKⅡγ RNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适转染滴度值(MOI)和转染效率。用重组载体转染细胞,确定干扰效果最佳的重组载体用于后续实验。细胞分为对照组、阴性载体组、干扰载体组;病毒转染5 d后通过TRAP染色及牙本质磨片骨吸收陷窝检测3组破骨细胞生成及骨吸收情况。结果成功构建了3个CaMKⅡγ重组干扰载体;最适MOI值为30,转染效率>80%。#3重组载体干扰效果最佳,干扰效率在mRNA及蛋白水平分别为78.16%和67.02%(P <0.01)。3组细胞中,干扰载体组多核破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数和面积较对照组分别下降了59.99%、54.19%和57.94%(P <0.01),而阴性载体组和对照组比较差异无显著性(P> 0.05)。结论 CaMKⅡγ RNA干扰可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收功能。

• 单位
  基础医学院; 华北理工大学