利多卡因对发育期海马神经细胞生长的抑制作用及相关机制研究

作者：陈兰涛; 孙鑫; 尹辉; 姚亚飞; 段宝民^*

来源：分子诊断与治疗杂志, 2019, 11(03): 176-188.

• 利多卡因
• 海马神经细胞
• 细胞周期

目的研究利多卡因对发育期海马神经细胞生长的影响及相关分子机制。方法通过做浓度依赖实验确定利多卡因实验浓度,依据不同浓度利多卡因分为3组,其中对照组给予0.9%生理盐水处理,不加利多卡因,A组加入1μM利多卡因,B组10μM利多卡因。采用四唑盐(MTT)法检测利多卡因对发育期海马神经细胞增殖能力的影响;采用PI单染法检测利多卡因对发育期海马神经细胞的细胞周期影响;采用Annexin V-FITC双染法检测利多卡因对发育期海马神经细胞凋亡水平的影响;采用RT-PCR实验检测mTOR、CyclinD1及Cleaved caspase3基因水平。采用Western blot法检测利多卡因对发育期海马神经细胞mTOR、CyclinD1、Cleaved caspase3蛋白表达的影响。结果通过MTT实验发现利多卡因处理第2 d后A组及B组神经细胞增殖水平显著低于对照组(P<0.05);第2 d后B组神经细胞增殖水平显著低于A组(P<0.05)。PI单染实验发现A组及B组的G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P<0.05);A组及B组的S期细胞比例显著低于对照组(P<0.05);A组及B组的G2/M期细胞比例显著低于对照组(P<0.05)。Annexin V-FITC双染实验发现A组及B组细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.05);B组细胞凋亡率显著高于A组(P<0.05)。RT-PCR实验发现A组及B组的mTOR、CyclinD1基因水平均低于对照组(P<0.05);B组的mTOR、CyclinD1基因水平低于A组(P<0.05);A组及B组的Cleaved caspase3基因水平显著高于对照组(P<0.05);B组Cleaved caspase3基因水平显著高于A组(P<0.05)。Western blot实验发现A组及B组mTOR、CyclinD1蛋白水平均低于对照组(P<0.05);B组的mTOR、CyclinD1低于A组(P<0.05);B组Cleavedcaspase3蛋白水平显著高于A组(P<0.05)。结论利多卡因可抑制发育期海马神经细胞生长,并导致神经细胞发生凋亡,利多卡因的神经毒性可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

• 单位
  开封市中心医院