伪狂犬病病毒gE/gI基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

作者：申一兰; 张强^*; 朱艳平; 刘佳; 邢瑞林; 岳锋; 李鹏; **; 张艳芳; 孙国鹏; 王选年^*

来源：动物医学进展, 2020, 41(03): 25-29.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2020.03.005

• 伪狂犬病病毒
• gE/gI基因
• 杆状病毒系统表达

为获得具有生物活性的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gE/gI蛋白,建立PRV抗体快速检测方法。将含有PRV gE、gI基因的质粒pFastBacdual-GP67-gE/gI转化至宿主菌,经位点特异性重组和蓝白斑筛选后获得重组杆粒rBacmid-gE/gI,转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。采用悬浮的Sf9细胞进行发酵并纯化产物,SDS-PAGE和Western blot分析镍柱纯化后的重组蛋白。结果显示,重组杆粒在4 800 bp处克隆出预期大小的条带,表示重组杆粒构建成功。SDS-PAGE和Western blot表明,在50 ku和65 ku处出现预期大小的条带,能与PRV标准阳性血清特异性反应,不与PRV gE/gI缺失疫苗免疫血清反应。结果表明gE/gI重组蛋白具有良好的反应原性,为PRV抗体快速检测及区分PRV野毒感染和疫苗免疫奠定了基础。

• 单位
  河南师范大学