Vaspin对棕榈酸诱导的INS-1细胞自噬水平的影响

作者：段瑞雪; 刘师伟^*; 常冰梅; 吴亚茹; 汪湄湄; 张佳新; 郭胜慧; 李欣; 张琦

来源：重庆医科大学学报, 2020, 45(03): 331-337.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.002088

• Vaspin
• 棕榈酸
• 自噬
• 胰岛β细胞功能

目的:研究脂肪细胞因子Vaspin对棕榈酸诱导的INS-1细胞自噬水平的影响。方法:培养INS-1细胞,分为正常组:用普通培养基培养24 h;棕榈酸(palmitic acid,PA)组:以0.5 mmol/L PA培养24 h;PA+Vaspin组:先加入320 ng/mL Vaspin预培养2 h,再以0.5 mmol/L PA+320 ng/mL Vaspin共培养24 h;PA+Vaspin+雷帕霉素(rapamycin)组:先以50 nmol/L Rapamycin预培养2 h,再以0.5 mmol/L PA+320 ng/mL Vaspin共培养24 h;PA+Vaspin+3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组:先以1mmol/L 3-MA预培养2 h,再以0.5 mmol/L PA+320 ng/mL Vaspin共培养24 h。葡萄糖(3.3 mmol/L和16.7 mmol/L)刺激胰岛素分泌实验检测各组胰岛素分泌水平,Western blot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、pm TOR、Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平,mRFP-GFP-LC3检测自噬流水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果:与正常组相比,PA组INS-1细胞上清液中胰岛素分泌水平在3.3 mmol/L葡萄糖和16.7 mmol/L葡萄糖刺激下均降低[(1.02±0.08)ng/mL vs.(0.54±0.06) ng/mL,P=0.000;(1.15±0.13) ng/mL vs.(0.71±0.05) ng/mL,P=0.000)],PA+Vaspin组较PA组升高[(0.76±0.03) ng/mL vs.(0.54±0.06) ng/mL,P=0.001;(0.91±0.04) ng/mL vs.(0.71±0.05) ng/mL,P=0.011)];与正常组相比,PA组INS-1细胞p-mTOR与mTOR蛋白比值低(2.04±0.14 vs. 1.19±0.09,P=0.000),PA+Vaspin组p-mTOR与m TOR蛋白比值较PA组高(1.51±0.05 vs. 1.19±0.09,P=0.005);同时,PA组自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与正常组相比明显增加(0.81±0.07 vs. 0.65±0.04,P=0.005;2.35±0.25 vs. 1.16±0.11,P=0.000),P62蛋白水平降低(1.04±0.19 vs. 0.60±0.08,P=0.000);PA+Vaspin组Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平较PA组低(0.58±0.04 vs. 0.81±0.07,P=0.001;1.95±0.08 vs. 2.35±0.25,P=0.007),P62蛋白增加(0.82±0.03 vs. 0.60±0.08,P=0.032);PA组自噬溶酶体数量较正常组多(8.33±1.53 vs. 0.33±0.58,P=0.000),Vaspin干预后降低(3.67±1.53 vs. 8.33±1.53,P=0.001);同时,PA干预INS-1细胞24 h后细胞凋亡明显增加(7.91±0.50 vs. 22.15±2.05,P=0.000),PA+Vaspin组较PA组细胞凋亡减少(13.23±1.97 vs. 22.15±2.05,P=0.000)。结论:Vaspin能够改善棕榈酸诱导的INS-1细胞过度自噬和细胞凋亡,改善胰岛β细胞分泌功能。

• 单位
  太原市中心医院; 山西医科大学