多杀性巴氏杆菌prfA基因的序列分析与原核表达

作者：李影; 郭东春; 王淑亚; 张爱芹; 胡晓亮; 王雅静; 刘家森; 姜骞; 曲娟娟; 曲连东

来源：中国兽医科学, 2014, 44(03): 293-297.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2014.03.007

• 多杀性巴氏杆菌
• prfA基因
• 序列分析
• 原核表达

为探索多杀性巴氏杆菌的致病机理,采用PCR方法分别扩增了家兔源和禽源多杀性巴氏杆菌C51-17、Pm898、Pm8916、Pm901、Pm9616、PmZM、PmQin菌株的prfA基因,并对其进行序列分析。将C51-17株的prfA基因克隆到质粒pET30a中,将重组表达载体pET30a-prfA转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,这7株菌株与GenBank登录的3株多杀性巴氏杆菌之间prfA基因在核苷酸水平上的同源性为95.6%100%,在氨基酸水平上的同源性为98.9%100%。诱导表达的重组蛋白PrfA的分子质量约为45.6ku,与预期的大小一致,以可溶性形式表达。重组蛋白PrfA可与家兔抗多杀性巴氏杆菌阳性血清反应,具有良好的反应原性。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 黑龙江八一农垦大学; 生命科学学院; 兽医生物技术国家重点实验室; 动物科技学院; 东北农业大学