PrxⅡ基因敲降L02细胞系的构建及其对细胞增殖的影响

作者：满艺; 甄兴; 孔令祖; 申贵男; 韩英浩; 金美华^*

来源：黑龙江八一农垦大学学报, 2019, 31(01): 49-55.

• L02细胞系
• PrxⅡ
• 细胞增殖
• RNA干扰技术
• 慢病毒

构建PrxⅡ基因敲降L02细胞系并确定PrxⅡ基因对L02细胞增殖的影响。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术、流式细胞术、荧光显微照相、蛋白质免疫印迹、MTT asssay等方法建立并检验PrxⅡ敲降L02细胞系及其对L02细胞的增殖影响。结果显示:选用5’-CCGCTTGTCTGAGGATACGTT-3’片段作为干扰PrxⅡ基因片段,利用慢病毒敲降L02细胞。同时处理嘌呤霉素筛选得到shPrxⅡ组细胞和Scramble组细胞,使用流式细胞术、荧光显微照相技术对shPrxⅡ组细胞和Scramble组细胞进行检测,结果均显示出GFP蛋白表达;此后利用蛋白质免疫印迹法检测出shPrxⅡ组细胞中PrxⅡ蛋白表达水平较Blank、Scram-ble组显著降低(P<0.05),Blank组与Scramble组细胞中PrxⅡ蛋白表达水平无明显差异。在MTT结果中显示shPrxⅡ组细胞增殖速率明显高于Scramble组,且具有统计学意义。成功构建PrxⅡ敲降的L02细胞系,发现PrxⅡ敲降后显著提高L02细胞的增殖速率。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 生命科学技术学院