亚洲璃眼蜱和小亚璃眼蜱Ferritin2基因的原核表达及蛋白特性预测

作者：翟雪洁; 宋瑞其; 郝蕴伟; 何文文; 郑会珍; 祖力亚·克力木江; 刘一凡; 巴音查汗^*

来源：动物医学进展, 2021, 42(11): 13-18.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2021.11.003

• 亚洲璃眼蜱
• 小亚璃眼蜱
• 铁蛋白Fer2
• 蛋白特性预测

铁蛋白2(ferritin 2,Fer2)是一类储存铁的蛋白,在蜱生理活动中起到解毒作用,是一种抗蜱疫苗候选抗原。利用原核表达系统,分别对亚洲璃眼蜱(H.as)和小亚璃眼蜱(H.an)Fer2基因进行了克隆、表达以及蛋白特性预测,为挖掘抗蜱疫苗候选抗原奠定基础。提取H.as和H.an总RNA,并反转录为cDNA,以此为模板克隆、表达出重组蛋白rHasFer2和rHanFer2,并分别用尿素透析法和亲和层析柱对2个重组蛋白进行了纯化;应用Western blot分析蛋白的反应原性;用Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction及SWISS-MODEL等软件对HasFer2和HanFer2序列进行蛋白特性预测。构建了重组质粒pGEX-4T-1/HasFer2和pET-28a/HanFer2,rHasFer2和rHanFer2均以包涵体形式表达,Western blot分析结果表明,2种蛋白可与相应阳性血清发生特异性反应。蛋白特性预测分析表明,HasFer2无跨膜区,不属于跨膜蛋白,分子质量为21.908 ku,等电点为5.542,主要存在于胞外(66.7%)和分泌系统的囊泡(22.2%);HanFer2有跨膜区,分子质量为23.033 ku,等电点为6.29,主要分布于胞质(34.8%)和胞外(26.1%);2种蛋白均有较高的抗原性,存在信号肽区域,均无T细胞表位,成功构建了蛋白3D模型。研究结果为探究Fer2在H.as和H.an中发挥的功能及抗蜱亚单位疫苗研制奠定了基础。

• 单位
  新疆农业大学; 动物科学学院